又见试剂失效，原因却在意料之外

前言

检测试剂是生化检测系统的重要组成部分，也是检测误差常见来源之一，试剂失效、试剂加错、试剂有气泡、试剂位放置错误等都会导致检测结果不准确，本文介绍一例由于工作人员试剂加入方法不正确导致实验室检测误差的案例。

案例经过

近期我科工作人员反映日立7600生化仪的α-羟丁酸脱氢酸酶（英文缩写HBDH）检测结果不稳定，间隔一段时间就会出现异常低值的检测结果，加入新的试剂后复测结果则正常，而且检测结果经常会出现“底物耗尽”的报警。2023年6月19日我科晚班人员再次反映日立7600生化仪的HBDH检测结果出现异常低值，笔者对同事反映的情况进行了原因查找分析，过程如下：

首先查看当天晚上病人结果，发现除了HBDH测定结果患者其它项目检测结果均无异常，但所有患者的HBDH检测结果均异常偏低；执行二个水平的室内质控样品测定后发现除外HBDH其它检测项目测定结果均在控，而两个质控样品的HBDH测定结果均失控，且均违反13S规则；用患者新鲜混合血清为标本测定HBDH结果也异常偏低，其反应监测曲线如“图一”所示，从反应曲线中可以看出加入试剂2后反应曲线平坦，吸光度无明显变化，这提示试剂与样本无化学反应，基于上述情况，笔者考虑HBDH检测结果异常为试剂失效导致的。

图一

为验证HBDH试剂是否失效，笔者以去离子水为标本，测定试剂空白，结果显示加入试剂2后的吸光度为10153（反应曲线如“图二”所示），小于试剂说明书中要求的试剂空白吸光度≥11000，由此说明HBDH检测试剂确已变质。

图二

我科的HBDH检测试剂是双试剂，那到底是试剂一失效还是试剂二失效呢？笔者先整瓶更换试剂一后重新测定去离子水样品，检测结果与前述无差别；再整瓶更换试剂二后重新测定去离子水样品，结果显示试剂空白的吸光度为15285，反应曲线如“图三”所示，吸光度大于11000，符合试剂说明书的要求，说明为试剂二失效导致结果不准确。

图三

更换试剂二后重新测定二个水平的室内质控标本，结果显示二个水平测定结果均在控。

重新测定新鲜患者混合血清，结果已不再异常偏低，反应曲线显示加入试剂2后吸光度出现明显下降，为正常的反应曲线形状，反应曲线如“图四”所示。

图四

那么导致试剂二失效的原因是什么呢？笔者通过咨询检测操作人员了解到之前使用的HBDH检测试剂并未过期，加入到仪器内的试剂也在开瓶有效期内（大约已放置一周，试剂说明书中提示开瓶有效为28天）；但笔者在原因查找过程中发现试剂二瓶身标签显示为很早以前的批号，咨询操作人员后了解到他们每次加入试剂方式为直接倒入原有试剂瓶内，并未更换新的试剂瓶，也未将瓶内残余试剂清空，故试剂瓶为很早以前的批号，而正是这种不正确的试剂加入方式导致检测试剂失效。

对检测操作员进行HBDH 检测操作规程再培训，改正上述错误的试剂加入方法后案例中的现像未再出现。

案例分析

HBDH检测试剂二中主要含有还原型辅酶I（英文缩写NADH），NADH曝露在空气中会被氧化成NAD+,在酸性条件下则更明显[1]，长时间的与空气接触会使得NADH浓度降低。由于工作人员长期没有清空试剂瓶中残留的试剂就直接加入新的试剂，残留的氧化失效的试剂就会稀释了新加入的试剂，使的新加入试剂中的NADH的浓度降低，试剂失效的速度加快，故达不到试剂说明中的28天开瓶稳定，同时由于底物浓度的降低导致该试剂的检测线性范围缩小，故更容易出现检测结果出现底物耗尽的报警。

案例总结

检验工作人员在添加检测试剂时应避免直接加入到原有试剂瓶中，加入过程中应小心避免出现气泡、加错试剂、试剂位放错等情况发生，只有在工作中多注重这些细节问题的正确处理，才能使检验全过程的质量控制措施得到真正的全面的执行，从而保证实验室检测结果准确有效，为临床医生诊疗活动提供有力支持。

参考文献：

[1] Wu JT,Wu LH,Knight JA.Stability of NADPH:effect of various factors on the kinetics of degradation[J].Clin Chem 1986 32:314-319.

作者：罗助建  南丰县人民医院检验科

编辑：月下

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