血培养仪报阳，为何镜检未见菌或转种失败？

临床微生物检验工作中有时会碰到血培养仪阳性报警，但涂片镜检时却找不到细菌，或者镜检发现细菌，但转种不出细菌而没法鉴定，对于这两情况应该如何分析和处理呢？下面根据笔者的知识和经验为大家进行分析总结，以供参考。

分析前，先了解一下细菌生长曲线

细菌生长曲线(Bacterial growth curve)专指单细胞微生物的。它是将少量的单细胞微生物接种纯种到一定容积的液体培养基后，在适宜的条件下培养，定时取样测定细胞数量。以细菌增长数目的对数做纵坐标，以培养时间做横坐标，绘制可得出一条生长曲线，我们称这条曲线为细菌的生长曲线。曲线显示了细菌的生长繁殖的4个时期:迟缓期，对数期，稳定期，衰亡期。

原因分析

一、血培养仪阳性报警，但涂片镜检时却找不到细菌的原因分析：

（一）假阳性

细菌的生长分迟缓期、对数期、稳定期及衰亡期4个时期，曲线呈“S”形（阳性曲线）。血培养仪一般会在细菌从迟缓期进入对数期（曲线）出现第一个拐点时报阳性，真阳性的曲线在报警后仍呈对数生长（曲线呈“S”形），而假阳性的曲线一般出现的第一个拐点后不再上升（无对数期曲线表现）。

血培养阳性反应曲线“S”形

血培养阴性（左）/假阳性（右）反应曲线

而产生假阳性的常见原因又有以下几点：

1. 环境因素 主要受温度、电压的影响。

①温度  如空调突然故障、培养仪被阳光直射等引起实验室环境温度剧烈变化，会造成血培养的生长曲线波动而导致的假阳性；

②电压 连接血培养仪的电压不稳定，或同一电源下连接其他大功率的设备并且有频繁使用，引发电压波动。生长曲线会因电压而波动导致的假阳性。

2. 培养仪及培养瓶

①培养仪未按时保养和校准，或在校准空位的过程中，有正在培养的血培养瓶未取出。

②血培养瓶过期，培养基底部变色，送检过程中受到剧烈振荡或其他变化。或者血培养瓶没有及时上机等情况均有可能导致假阳性的发生。

3. 采血量

无菌血液在血培养瓶培养时由于血液细胞本身代谢产生CO2可以导致曲线的产生变化，当采血量过多的时候可能会造成假阳性（过少，易漏检）。此外对于部分血液病、肿瘤患者，由于其血液细胞的代谢率较高，也可能引发假阳性。

（二）技术因素

临床工作中有些待检菌为十分微小的革兰阴性杆菌（革兰染色为红色），因为革兰染色背景一般也为红色，微小的阴性杆菌混在培养液及血液的残渣里，经验不足的检验人员易漏检。

二、镜检发现细菌，但转种失败的原因分析：

1.阳性菌株生长缓慢 像厌氧类细菌，只有在隔绝氧气的环境下才能迅速繁殖。

2.阳性菌株为苛养菌 苛养菌营养条件要求较，应用普通平板转种，可能会转种失败。

3.阳性菌株产生自溶现象 对菌株产生自溶现象的阳性瓶，如果不能及时转种，也可能转种失败。

处理流程及方法

一、血培养仪阳性报警，但涂片镜检时却找不到细菌的处理：

先观察培养液的混浊度和仪器上的反应曲线：

1. 若培养液无明显混浊，反应曲线无对数期的曲线表现，一般为假阳性；可根据上述分析的原因作相应处理：

① 如果实验室发生假阳性概率较高的情况，应先评估实验室环境，血培养仪摆放位置等。建议实验室的温度维持在20—25℃之间，血培养仪避免阳光直射，避免摆放在空调出风口处，避免温度剧烈变化引起细菌生长曲线波动；检查电压，避免同一电源下连接其他大功率的设备并频繁使用，避免电压波动引起细菌生长曲线波动变化。

② 定期对血培养仪进行保养、校准和检定，保证血培养仪处于最佳状态。

③ 检验者做好查对工作，血培养瓶上机前认真检查血培养瓶是否过期，培养基底部是否变色等情况。

④ 查阅阳性样本患者的血常规结果及临床诊断，若为血细胞极度异常增高的患者，结合涂片可进一步确认为假阳性。

⑤ 对于假阳性的标本，培养时间没到的情况下继续培养，或从报阳血培养瓶抽出10ml培养液打入新的血培养瓶重新培养，培养时间足够（5天）的可报告阴性结果。

2. 培养液明显混浊，反应曲线有明显对数期的曲线表现，则重新涂片染色镜检，必要时请经验丰富的微生物检验人员会诊。

二、镜检发现细菌，但转种失败的处理方法：

1. 先对报阳血培养瓶种类进行分析，根据不同种类作相应处理。若为SN瓶或FN瓶报阳，建议转种厌氧平板，进行厌氧培养；若为PF瓶、FA瓶或SA瓶报阳，则建议用含血的BHI琼脂进行转种。

2. 若怀疑为苛养菌，则加种巧克力平板或其他特殊平板。

3. 若发现阳性菌株有自溶现象，应尽快转种，并且转种时应增加阳性培养菌液。

总之，检验人员平常要加强理论知识的学习，在进行血培养相关检验工作中，要多观察、多分析、善总结，避免漏检，提高血培养结果的准确性，为临床进行血流感染相关疾病的诊疗提供正确的依据。

作者：陈泽城  广东省高州市人民医院检验科

编辑：伟

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