基层检验体液蛋白测定方法

在基层检验科体液窗口每天都会收到各种各样的体液标本，其中主要有脑脊液、浆膜腔液和尿液等，它们的检测指标中都有一项蛋白测定，但是它们其中所含的蛋白的种类和量又不同，让我们一起看看基层检验人员是如何在现有简陋的条件下让各种蛋白显形的。

一、潘氏试验——脑脊液蛋白测定

潘氏试验作为基层检验科检测脑脊液中蛋白的常用方法，其操作简单，为日常检测蛋白的方法之一。潘氏试验，我们常称它为 Pandy 试验，原理是潘氏试剂中的苯酚可与脑脊液中的球蛋白结合，形成不溶性的蛋白盐，呈现为我们肉眼观察到的白色浑浊或沉淀，所以该方法也被称为球蛋白定性试验。健康人脑脊液中含的蛋白质很微量，且主要以白蛋白为主，在潘氏试验检测时不显示变化，为阴性。当发生脑膜炎症状和脑组织病变时，如化脓性脑膜炎，结核性脑膜炎、流行性脑炎、脊髓灰质炎时，脑脊液中的蛋白质会有不同程度的增加，且增加最多的为球蛋白，在用潘氏试剂检测时会呈阳性。而当脑外伤、脑出血等时，在用潘氏试剂检测时更是呈强阳性反应。

Pandy试剂的配制：Pandy试验中所用的苯酚试剂饱和度降低会出现假阴性结果，所以Pandy试剂需要定期重新配制。先在玻璃瓶中加入200mL热的蒸馏水，再加入10mL苯酚（石碳酸），接着用玻璃棒强力混合后，在37℃孵箱放置48小时后放置室温备用。检测脑脊液蛋白时，吸取10mL放置后的Pandy试剂上清液置于透明试管中，找一处黑色背景，将一滴混匀后的脑脊液悬空滴入，对照背景察看是否会呈现白色浑浊或者沉淀，如有白色浑浊或者沉淀则判定为阳性，无则判定阴性。

二、李凡他试验——浆膜腔积液蛋白质测定

李凡他试验，我们又称为Rivalta试验，也称黏蛋白定性检查，作为一种简易的黏蛋白筛检试验，可粗略区分浆膜腔积液为炎性积液还是非炎性积液，该方法简单易操作，试剂易得到，且容易保存，特别适合基层检验科使用。原理是黏蛋白在浆膜间皮细胞受炎症刺激时分泌增加，是一种酸性糖蛋白，其等电点为pI3～5，在稀乙酸溶液中（pH3～5）产生白色雾状沉淀，即为阳性。利用李凡他试验检测浆膜腔积液蛋白质的变化，是作为鉴别渗出液和漏出液最主要、最常用的方法之一。漏出液属于非炎性积液，其主要是由降低的血浆胶体渗透压，增高的血管内压力，淋巴管阻塞等引起，漏出液中所含黏蛋白很少，多数反应为阴性。渗出液属于炎性积液，常常在感染性或非感染性因素时常见，有时于恶性肿瘤时也可见，渗出液中含有的黏蛋白很大量，在李凡他试验时反应多呈阳性。

Rivalta试验的操作：将 100 mL 的蒸馏水装入 100 mL 有刻度的量筒内，再悬空滴加 2 滴或100μL冰醋酸后，充分混匀，在黑色背景下滴入 1~2 滴浆膜腔穿刺液，观察在 50 mL 刻度以下是否有白色云雾状混浊。如有则为阳性，要注意必要时离心后取上清液进行测定。

三、磺基水杨酸法

磺基水杨酸法（SSA），我们又称为磺柳酸法。原理是在略低于蛋白质等电点的酸性环境下，磺基水杨酸根离子与蛋白质氨基酸阳离子结合，形成不溶性蛋白盐而沉淀，判定为阳性。沉淀的量或者溶液反应后的浑浊程度，可以反映蛋白质的含量，是尿液蛋白质的定性或者半定量检查方法。该方法反应灵敏、操作简便、结果显示快，且能够与白蛋白、糖蛋白、球蛋白和本周蛋白等发生反应，特别适合基层检验科尿液蛋白的复检方法。该方法的敏感度达到50mg/L，因而有一定的假阳性。CLSI将磺基水杨酸推荐为尿蛋白的确证试验。

四、加热乙酸法

加热乙酸法，是一种经典的检测蛋白质的方法，原理是蛋白质在预热变性后发生凝固，再加稀酸使尿液pH降低到接近其等电点（pH4.7），使变性凝固的蛋白质进一步沉淀判定阳性，同时消除某些磷酸盐和碳酸盐析出所造成的浑浊干扰。该方法干扰因素少、特异性强，可以与白蛋白和球蛋白发生反应，但灵敏度在150mg/L，比较低。该方法可因盐类析出产生浑浊而引起假阳性，则必须要按照加热-加酸-再加热的标准操作程序进行操作。该方法适宜基层医院在疗效观察和预后判断时使用。

五、试带法

尿液试带法的原理是利用pH指示剂的蛋白误差。该方法适用于尿液分析仪，也可肉眼观察，操作简单、显色快，但该方法只对白蛋白较灵敏，球蛋白的敏感度仅仅占白蛋白的1/100～1/50，非常不敏感，且无法检测出本周蛋白。所以本方法只作为健康普查或临床筛查尿蛋白的方法。

六、热沉淀-溶解法——本周蛋白

本周蛋白（BJP）尿，又称轻链尿，也称凝溶蛋白尿。是过剩的骨髓瘤细胞合成的异常免疫球蛋白轻链，自由通过肾小球滤过膜，浓度超过近曲小管重吸收的极限时，从尿液中排出来，我们称之为本周蛋白尿。

基层检验科仍然使用热沉淀-溶解法检测尿本周蛋白，检测原理是本周蛋白在pH4.9±0.1时，加热至40～60℃时凝固，继续加热至90～100℃时发生溶解，这时停止加热，待温度降低至56℃左右时，又可以发生重新凝固，能够出现该种变化时判定存在本周蛋白。

尿液本周蛋白虽然对疾病诊断缺乏特异性，如骨髓瘤，应配合其他检查如X线、骨髓穿刺、病理活检等检验才能确诊，但是在基层检验科，能够运用热沉淀-溶解法，进行初步判定，为病人提供很大的便捷。

由于各种体液中含的蛋白的种类和量不同，需要的检测方法则不尽相同，尤其是在基层检验科，实验条件相对落后时，这就需要我们思路清晰，对症下药，选择不同方法，识别不同蛋白，让蛋白无处可逃，为临床初步鉴别诊断提供可靠的依据。

作者：广安市广安区人民医院 蓝青青

编辑：月下