检验人不可或缺的工具—移液器的使用与养护

移液器的使用与养护

1.移液器简介

移液器根据排液的方式分为两类：一类是空气排代式，一类是活塞排代式。常用的一般是空气排代式，它主要是利用调节负压和正压的原理来排放所需体积的液体，因此移液器中的O型环、弹簧和活塞是重点养护的对象。移液器可分为单道和多道（8道和12道），也可分为手动和电动。

2.移液器的正确使用

2.1使用前

（1）每袋吸头装配前应该进行抽样筛选，观察磨刺、弯头的数量，如果不合格数超过1/3，则不予使用。

（2）先反复按移液器感受移液器整体情况，感受移液器是否松动；调到枪的中小量吹打10次左右，检查枪的回位感觉。

（3）检查是否漏液，是否长期没有养护（上油）。

2.2吸头安装

单道枪：旋转安装法，具体的做法是，把移液器顶端插入吸头（在轻轻用力下压的同时，把手中的移液器按顺时针方向旋转，切记用力不能过猛，更不能采取“剁”吸头的方式来进行安装）。

排枪：应该将移液器套柄插入吸头后，左右旋转或前后用力上紧，切不可用移液器反复撞击吸头来上紧，这样操作会导致吸头变形而影响精度，严重的则会损坏移液器。

2.3 设定容量

设定所需要的容量时应调整到大于设定容量值的1/4圈，再调至设定值，这样可排除机械间隙，使设定量值准确，即先将容量调节钮旋转超过目的容量值的1/4圈，再向下调至设定值。

2.4吸液

（1）吸头安装：连接恰当的吸嘴（方法参见2.2吸头安装）。

（2）按下控制钮至第一档。

（3）将移液器吸嘴垂直进入液面下1-6mm（视移液器容量大小而定）。

0.1-10ul容量的移液器进入液面下1-2mm；

20-200ul容量的移液器进入液面下2-3mm；

1-5ml容量的移液器进入液面下3-6mm；

注：为使测量准确可将吸嘴预洗3次，即反复吸排液3次。

（4）使控制钮缓慢滑回原位。

（5）移液器移出液面前略等待1-3秒；1000ul以下停顿1秒；5-10ml停顿3秒。

（6）缓慢取出吸嘴，确保吸嘴外壁无液体。

（7）当移液器吸嘴有液体时切勿将移液器水平或倒置，以防液体流入活塞室腐蚀移液器活塞。

2.5 排液

（1） 将吸嘴以一定角度抵住容器内壁；

（2） 缓慢将控制钮按至第一档并等待1-3秒；

（3） 将控制钮按至第二档过程中，吸嘴将剩余液体排净；

（4） 慢放控制钮；

（5） 按压弹射键弹射出吸嘴。

2.6 使用完毕后

移液器使用完毕后，把移液器量程调至最大量程，垂直放置在移液器架上。

3.移液器的养护

（1）如果液体不小心进入活塞室应及时清除污染物；

（2）移液器使用完毕后，把移液器量程调至最大量程，垂直放置在移液器架上。

（3）根据使用频率所有的移液器应定期用肥皂水清洗或用60%的异丙醇消毒，再用双蒸水清洗并晾干。

（4）避免放在温度较高处以防变形致漏液或不准；

（5）发现问题应及时找专业人员处理。

4.使用移液器的注意事项

（1）当移液器吸嘴有液体时切勿将移液器水平放置或倒置，以防液体流入活塞室腐蚀移液器活塞；

（2）正确使用移液器吸液、排液，以达到高精准度，尤其注意排液的（2）（3）操作。

（3）平时检查是否漏液的方法：

吸液后在液体中停1-3秒观察吸头内液面是否下降，如果液面下降首先检查吸头是否有问题，如有问题更换吸头，更换吸头后液面仍下降说明活塞组件有问题，应找专业维修人员修理；

（4）需要高温消毒的移液器应首先查阅所使用的移液器是否适合高温消毒后再进行处理；

（5）尽量使用移液器的最大量程，如：吸200ul的液体使用200ul移液器的精度要大于使用1000ul的移液器；

（6）使用排枪及用手卸枪头时，应使移液器按顺时针方向转动，以防其前端松落；

（7）调枪：不同量程的枪，为了保证精确度要求使用量程的中上范围；因为机械间隙的存在，对目的刻度要从大拧到小。

5.移液器使用的常见问题

5.1使用一段时间后按钮按下后回弹不畅

（1）此类情况更多发生在1000ul和5000ul移液器上，200ul移液器出现的较少。

（2）造成的原因：由于使用中将液体吸入活塞室，吸入的液体未及时清理。干结后粘在活塞或活塞壁上，破坏了活塞表面的光洁度。使活塞上下移动的阻力增大，从而产生上述情况。

（3）排除的方法：清理。如不及时清理将使零件损坏。

5.2使用一段时间后出现漏液

（1）此类情况可以发生在任何规格的移液器上，但在反应现象上有所不同。

a．100ul以上的移液器出现的情况多是液体吸取后液体从吸头尖端成滴的漏液；

b．20ul的移液器出现的情况多是无明显滴液，但会或多或少的感到吸液量偏少；

c．10ul以下的移液器出现的情况多是明显的排液时排不尽，尤其是微量液体的吸取时更为明显。（排除粘稠液体等因素形成的原因）

（2）造成的原因：

目前我们使用的大多数移液器是空气排代式移液器，它是由数码调整、数码定位、活塞、活塞密封、吸排定位、吸嘴连接、退头装置等系统组成。

以上情况都是出在活塞密封系统的问题。

当情况（1）出现后未及时清理仍对付着使用，轻者干结物聚集到一定程度后将活塞粘住。重者由于吸入的往往不光是粘稠液体还可能有酸碱成分，酸碱中和后形成的颗粒与干结物形成研磨物，在反复按动吸排按钮的过程中是活塞很快磨损，造成活塞密闭性破坏从而漏液。

有些移液器使用时吸排酸碱液体多一些，操作时使用不规范造成液体进入活塞室又从不清理，如果您使用的移液器活塞是不锈钢材料的，一支新枪不出45天活塞组件即可锈蚀报废，这时使用者往往认为所用移液器质量有问题，找来当时购买移液器的经销商理论一番，结果往往是不愉快。

（3）处理方法：使用中出现液体上冲后使用者应及时清理。

5.3移取体积跟实际体积不相符

用电子天平称量、跟准确的移液器多次吸取来比对

找专业工程师校正

5.4多久校正一次移液器

根据不同级别实验室要求：

GLP/GMP级别：每3-6个月校正一次；

R&D高要求实验室：6-12个月校正一次；

一般实验室：例如临床检验、普通分子生物学、生化试验等，一年校正一次。

与校正的费用相比，实验中由于移液器不准确带来的时间损失和试剂浪费更加昂贵。如果发现移液器某处受到损伤，应立即咨询并修复，这样可以避免更多的部件受损。

5.5液体上冲后的处理方式

由于使用过程中液体进入活塞室造成活塞及密封圈污染，液体干结后是活塞移动阻力增大，致使使用中活塞上下移动受阻情况产生，在使用过程中注意。建议经常清理。

清理的方法：

（1）用随移液器带的白色专用工具将退头器卸下，右手握枪，右手拇指按退头器按钮，左手食指及拇指拿工具插入退头器连接槽轻轻抬起的同时，其它3指握退头器向左轻轻一拉退头器即可卸下。也可左手握枪进行拆卸，将退头器及退头器按钮一一放好。

（2）用白色专用工具的六方端插入下端，将六方处反时针旋转将下端件拧松。在完全卸下下端件过程中小心与内部连接零件及弹簧座以及相对位置。如怕忘记可按各自的记忆方法摆放，做如下处理：

a．清理细弹簧（一级簧）上污物后加硅油脂。

b．清理弹簧座的污物。

c．清理“O”型环和“O”型环座及弹簧（一级簧）上的污物以后加硅油脂。

d．清理活塞上的污物后对阳光看活塞上不要有纤维，如有应吹净后加硅油脂。

e．下端件内孔清理。

（3）按刚才拆卸的方向顺序将零件一一装上。安装下端件后要用工具的六方端将下端件拧紧，但下端件及固定座都是高分子材料不宜拧得过紧，否则会将零件损坏。

（4）正常握枪拇指按动按钮3-4次后即可正常吸排液。

5.6移液器的校正

a．不同量程的移液器需要不同灵敏度的天平，如20ul移液器需用1/100000天平，1000~5000ul移液器需要1/1000天平。

b．校准应在无通风的房间，移液器和空气温度在20℃-25℃之间，相对湿度必需在55%以上。特别是当移液量在50ul以下，其空气湿度应越高越好以减少蒸发损失的影响。

c．天平上放置一个小三角烧瓶，用待标定的移液器吸取蒸馏水（隔夜存放）加入小三角烧瓶内底部（垂直吸液，吸头尖在液面下停留1秒使压力平衡后将移液器轻缓的移至天平上的称量烧瓶内并将液体按照操作要求排出，排液后吸头内不得有残留液体。等天平数值平稳后读数。如3-5次称量后数值与标准相差很大时可用白色调整工具进行调整，直至数值符合标准为止），每次称重后计量，去皮称重后再加蒸馏水，连续加蒸馏水10次，加蒸馏水的量根据待标定的移液器不同规格而不同。

进行以上操作后使用者对于类似结构的移液器均可自行处理，以提高实验的可靠性。

移液器校正前必须执行的工作：

根据不同的实验要求进行清理调校。如：要做定量试验时由使用者本人进行清理调校。如实验室有专门从事仪器维护的人员，应交仪器维护人员维护。

5.7移液器在不使用时为何要调至最大量程

移液器使用中存在许多不正确的操作方法，其中使用后未将移液器调至最大量程是普遍现象之一。

（1）目前我们使用的空气排代式移液器都是由一活塞在活塞室内上下移动形成正负气压实现液体的吸排。

移液器吸排的对象是各种不同的液体，而不同的液体有不同的化学特性。液体的蒸发和汽化在使用者使用的过程中也在进行着。液体的蒸发和汽化物随按钮吸排动作产生往复气流进入活塞室（排除人为将液体吸入的因素），并充满活塞室空间。因而活塞表面也被附着上液体的蒸发和汽化物。

如果移液器在用后调至最大量程，即可将附着在活塞表面的液体蒸发和汽化物由密封圈及“O”型环组成的密封系统推向活塞的顶端，以减少不明液体的混合物对活塞的腐蚀。（这样的操作并不能替代移液器的定时定期的维护，当进行移液器的定时定期的维护时，将活塞顶端的污物清理干净是其中任务之一）

（2）目前我们使用的空气排代式移液器在往复运动时，有一个方向运动是由弹簧实现回位的，而大多数设计移液器量程设定的最大量是弹簧相对压力最小的位置，如果移液器是在最小设定量时回位，弹簧压力最大。

依据以上两点移液器设计的特定条件应将移液器在使用后调至最大量程。但这种情况的处理也有特例，如：CAPP移液器由于其数码调整的独特设计，使用中按钮回位后活塞始终处于起始位置，即最大量程的位置。

5.8为何要使用有过滤器的枪头？

空气中容易有气溶胶污染，尤其是PCR实验室更易产生。没有滤芯的枪头，在吸取和排放液体时枪内和枪外的气体反复接触，从而不断产生N+1次的反复污染（N为吸取液体的次数）。所以为了避免此种情况的发生，使用有过滤芯的枪头可防止枪内空气与枪外空气的接触，防止气溶胶污染的发生。

6.实验室管理移液器的注意事项

（1）新到移液枪要记录货号，上一层硅油，争取在保修期前使用，解决可解决的问题。

（2）选用一套备用移液枪，作为修正其它使用中的移液器的参照标准；不同的用途的移液枪要标明及分开使用，如RNA等要避免交叉污染的实验需要用带FILTER的枪头。

（3）先清理后消毒

所有的移液器都可拆卸，取出O型环和活塞清理后抹上硅油，外部材料可直接高压消毒或超声清理。每种品牌的移液器处理也不同：RAININ可直接拆卸，进行去污处理并涂上硅油；Eppendorf移液器有两种：3111和4910；3111类移液器是半支消毒，4910的是整支消毒；GILSON的移液器不能消毒。

（4）当使用者不慎将液体吸入枪体后，应及时清理。即使用者将手头试验阶段结束后清理。

（5）以上处理后仍无法正常使用：

a.查阅移液器购买记录，如在保修期内可寻求移液器保内的售后服务。

b．如已过保修期，可找原移液器供应商或专业移液器维修，以得到可靠地服务。

7.电动移液器

一般电动移液器常用模式有p模式，d模式，dd模式三种。

p模式：这种模式下电动移液器是吸取试剂后全部打出。

d模式：这种模式下电动移液器是吸取试剂后分几次打出相同体积的试剂。

dd模式：这种模式下电动移液器是吸取第一试剂后吸一部分空气再吸取另一种试剂然后一次全部打出。

作者：郭花香（山西省长治市中医医院检验科）

编辑：种一棵树

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